从水蛭中，有效成分提取工艺的研究
发布日期：2011/5/10 阅读：2444 来源：原创
本文研究目的筛选水蛭有效成分的最佳提取工艺。
方法：以含氮量为指标，先比较水煎、渗漉两种提取方法，后采用正交试验，对水蛭的提取工艺进一步优化。结果：水蛭的最佳提取工艺为水蛭药材先用l0倍量的水浸泡30min，提取3次，lh／次。结论：得到了水蛭提取的最佳提取工艺。
水蛭系水蛭科动物水蛭(Hirude Nopponica Whitman)等的干燥全体。主要成分含蛋白质、脂肪、水蛭素等。水蛭擅于破血逐淤，药性峻猛，是常用的破血药。现代研究表明，水蛭在抗凝血、抗血栓形成等方面表现出强烈的生物活性，可用于心脑血管疾病的治疗，其中水蛭素是至今为止所发现的最强大的凝血酶抑制剂之一。目前对水蛭有效成分的提取的报道很少，工艺参数不确切，因此，我们系统的研究了水蛭的提取工艺并总结如下。
1 材料和仪器
水蛭购于广州市清平药材市场。DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)、JA1003电子分析天平(上海天平仪器厂)、凯氏定氮仪(上海洪纪仪器有限公司)、硫酸等试剂都为分析纯。
2 方法和结果
2．1水蛭中含氮量的测定
精密量取含水蛭lg的提取液，并作相应的稀释，具体操作参考《中国药典》2005年版一部附录43进行含氮的测定。
2．2水蛭提取方法的确定
2．2．1水煎煮
将水蛭干燥药材粉碎成粗颗粒，称取40g，采用水煎煮提取，共提取3次，每次为400ml，提取时间均为1h。合并提取液于水浴中浓缩，定容到400ml。
2．2．2乙醇渗漉
将水蛭药材粉碎成粗颗粒，称取40g，加70％乙醇润湿3h，装筒浸渍24h后，以10滴／min的速度用70％的乙醇渗漉，收集1200ml渗滤液，回收乙醇并定容到400ml。
2．2．3不同提取方法的比较
将以上两种药液进行含氮量的测定，比较两种方法对水蛭有效成分的提取率，由表1结果可知，水煎煮提取含氮量略高于乙醇渗漉，且水煎煮提取工艺简便，乙醇渗漉比较繁琐，因此采用水煎煮进行提取水蛭有效成分。
表l 两种不同提取方法样品中含氮量的比较
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水煎煮 乙醇渗漉
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氮含量（%） 3.456 2.892
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2．3水煎煮提取工艺的优化
每组试验取40g水蛭药材进行水煎煮提取，以氮含量为考察指标，采用L9(34)正交试验对加水量、浸泡时间、提取时间及提取次数进行筛选，正交实验表头设计见表2，正交实验结果见表3，方差分析见表4。
表2 L9(34)正交实验表头设计
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水平 加水量（倍） 提取时间（h） 浸泡时间（min） 提取次数
（A） (B) (C) (D)
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1 8 0.5 0 1
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2 10 1.0 30 2
3 12 1.5 60 3
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表3 正交试验结果
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试验号 因 素 指标含氮量（%）
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1 1 1 1 1 1.569
2 1 2 2 2 3.465
3 1 3 3 3 3.126
4 2 1 2 3 4.467
5 2 2 3 1 3.653
6 2 3 1 2 3.806
7 3 1 3 2 3.567
8 3 2 1 3 3.257
9 3 3 2 1 3.015
K1 2.720 3.201 2.877 2.746
K2 3.975 3.458 3.649 3.613
K3 3.280 3.376 3.449 3.617
R 1.255 0.257 0.772 0.871
表4 方差分析
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误差来源 SS V F 显著性
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A 2.733 2 23.730 *
B 0.100 2 1.000
C 0.962 2 9.620
D 1.510 2 15.100
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误差 0.10 2
由表4方差分析表可知，因素A有显著性意义，即加水量有显著性意义(P<0．05)，B、C、D的影响无显著意义，由表3直观分析可知，各因素主次为A>D>C>B，且以A2B2C2D3为较佳的工艺，结合直观分析与方差分析，选择A2B2C2D3为最佳工艺，即取水蛭药材先用10倍量的水浸泡
30min，提取3次，1h／次。
3 讨论
3．1按照药典的要求，用凯氏定氮仪测定水蛭中的含氮量，具有操作简单，对仪器要求不高的优点，并发现有较高的操作重现性与精密度。
3.2本实验先从水提法与渗漉法中筛选较佳的提取方法，后对较佳提取方法进行具体优化，筛选的水蛭最佳工艺提取率高，操作简便。